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Tambin se llama VOLUMEN DE EXCLUSIN Detector (UV) CROMATOGRAFIA EN COLUMNA Bomba(s) Registrador Solventes (fase mvil) COLUMNA Mezclador Inyector Colector de fracciones SEPARACIN DE COMPONENTES CELULARES POR ULTRACENTRIFUGACIN Volumen de lquido en los intersticios (Vo) VT = Vo+ Vi + Vg 2.0 Volumen total de lquido (Vt) Volumen de lquido en las partculas (Vi) Absorbancia (280 nm) Volumen ocupado por la matriz (Vg) 0.0 120 100 80 60 40 20 Volumen de elucin (ml) CROMATOGRAFA DE EXCLUSIN MOLECULAR Flujo isocrtico, condiciones nativas o desnaturalizantes CROMATOGRAFA DE EXCLUSIN MOLECULAR Nombre comercial Tipo de matriz Rango tamao Sephadex G-50 dextran 1500 - 30000 Sephadex G-100 dextran 4000 - 150000 Sephacryl S-200 HR dextran 5000 - 250000 Ultrogel AcA 54 polyacrylamide/agarose 6000 - 70000 Ultrogel AcA 44 polyacrylamide/agarose 12000 - 130000 Ultrogel AcA 34 polyacrylamide/agarose 20000 - 400000 Bio-Gel P-60 polyacrylamide 3000 - 60000 Bio Gel P-150 polyacrylamide 15000 - 150000 Bio-Gel P-300 polyacrylamide 60000 - 400000 2.0 A280 nm 0.0 120 100 80 20 40 60 2.0 A280 nm 0.0 120 100 80 20 40 60 Volumen de elucin (ml) CROMATOGRAFA DE EXCLUSIN MOLECULAR:Estimacin de masas moleculares Marcadores de masa molecular Recta de calibrado 25 kD 67 kD 14 kD 43 kD Volumen de elucin (ml) Protena problema Log Mr CROMATOGRAFA DE EXCLUSIN MOLECULAR VENTAJAS: Flexibilidad en cuanto a solvente Condiciones poco agresivas Proporciona informacin estructural INCONVENIENTES: Poco resolutiva, debido a difusin La muestra se diluye Es necesario aplicar volmenes muy pequeos Etapas finales de protocolos de purificacin 2.0 0.3 kD 120 kD 0.0 1.2 1